요약

이 작품은 피부 노화 개선을위한 생선 콜라겐 음료를 공개합니다. 

이전 연구에서는 콜라겐 손실의 대표적인 특성과 단백질 분해 효소 매트릭스 메탈 로프 로테이나 제 (MMP)의 산화 유도 발현 각도에서 피부 노화를 자주 논의했지만, 

소수의 그룹에서는 단백질 폴딩 및 DNA 복구를 향상시키는 경구 가수 분해 콜라겐의 효능을 종합적으로 조사했습니다. 

주목할만한 세포 행동을 개선합니다. 피부 노화 지연에 대한 광범위한 관점을 설명하기 위해, 우리는 분자 및 세포 측면에서 콜라겐 음료 처리 된 섬유 아세포 세포를 조사했습니다. 

그 결과 콜라겐 음료가 ROS 억제, 세포 외 기질 (ECM) 단백질 합성 촉진, 미토콘드리아 활성 증가, 및 정확한 단백질 폴딩, DNA 불일치 복구 (MMR) 및 염기 절제 복구 (BER)에 관한 

유전자 발현의 개선. 실험 결과는 세포 모델을 기반으로하지만, 긍정적 인 결과는 노화 방지를위한 구강 가수 분해 콜라겐 보충제의 영향에 대한 자세한 내용을 제공 할 수 있다고 믿습니다. 

요컨대, 콜라겐 음료의 시너지 효과가 산화 손상을 감소시킬뿐만 아니라 세포 기능을 개선하여 UVA에 의해 유발되는 유해한 영향을 보상 할 수 있음을 성공적으로 입증했습니다. 

우리는 긍정적 인 결과가 노화 방지에 대한 구강 가수 분해 콜라겐 보충제의 영향에 대한 자세한 내용을 제공 할 수 있다고 믿습니다. 

요컨대, 콜라겐 음료의 시너지 효과가 산화 손상을 감소시킬뿐만 아니라 세포 기능을 개선하여 UVA에 의해 유발되는 유해한 영향을 보상 할 수 있음을 성공적으로 입증했습니다. 

우리는 긍정적 인 결과가 노화 방지에 대한 구강 가수 분해 콜라겐 보충제의 영향에 대한 자세한 내용을 제공 할 수 있다고 믿습니다. 

요컨대, 콜라겐 음료의 시너지 효과가 산화 손상을 감소시킬뿐만 아니라 세포 기능을 개선하여 UVA에 의해 유발되는 유해한 영향을 보상 할 수 있음을 성공적으로 입증했습니다.

1. 소개

콜라겐은 인체 단백질 구성의 약 30 %를 차지하며 결합 조직, 즉 피부, 혈관 및 연골에서 우세한 단백질입니다 [ 1 ]. 

엘라스틴, 히알루로 네이트 (HA) 및 프로테오글리칸과 결합 된 콜라겐은 ECM을 형성하여 세포에 기계적 특성과 세포 안정화 또는 기능화를위한 분자 신호를 부여합니다 [ 2 ]. 

다른 장기와 달리 피부는 환경에 직접 노출되며 그 외형은 전반적인 노화 과정의 전형을 나타냅니다 [ 3 ]. 

피부 노화는 일반적으로 주름, 느슨 함, 갈색 반점, 두꺼워 짐 및 거칠어 짐이 특징이며, 이러한 악화는 ECM 단백질의 분해 및 고급 당화 최종 생성물 (AGE)의 축적과 관련이 있습니다.4 , 5 ]. 

콜라겐 I 형과 III 형은 피부 구성의 약 95 %를 차지하며 피부 속성의 탄력성, 강도, 내구성 및 탄력성을 담당합니다 [ 1 , 6 ]. 

시간이 지남에 따라 노화로 인해 매년 콜라겐 함량이 1 % 감소합니다 [ 7 ]. 

외인성 노화 무질서 콜라겐 섬유에 적용하고 우연한 엘라스틴 파편의 축적이있을 연대순 노화는 주로 콜라겐과 엘라스틴 합성 감쇠에 기부된다 8]. 

여러 연구에서 오래된 피부는 젊은 피부에 비해 I 형 프로 콜라겐의 낮은 발현 수준과 콜라게나 아제 매트릭스 금속 단백 분해 효소 (MMP)의 상향 조절을 나타냅니다 [ 9 , 10 ]. 

외인성 노화는 종종 자외선 조사, 부적절한 생활 방식 및 환경 오염 물질과 관련이 있습니다 [ 11 ]. 

이러한 유해 요인 중 UVA (314-400nm), UVB (290-320nm) 및 UVC (100-280nm)를 포함한 UV 조사는 조기 피부 노화 (광노화)의 주요 원인이며 직접적인 DNA로 이어집니다. 

거대 분자 (예 : 지질, 단백질 및 DNA)에 대한 손상 또는 UV 유발 산화 손상 [ 12]. 

예를 들어, 활성 산소 종 (ROS)은 DNA 염기 인 데 옥시 구아노 신을 공격하여 8- 옥소 구아닌과 GC-TA 전이 돌연변이 [ 13 ] 의 돌연변이를 일으킬 수 있습니다 . 

UV 조사에 15 분간 노출 된 후 사람의 피부에서 ROS 수준이 크게 증가한 것으로 나타났습니다 [ 14 ]. 

UV 매개 ROS는 AP-1의 핵 전사 인자와 활성화 된 B의 핵 인자 kappa-light-chain-enhancer (NF- κ B) [ 15 ] 와 관련된 신호 경로를 활성화 할 수 있습니다 . 

AP-1 및 NF- κ B 캐스케이드는 MMP 유전자 (예 : MMP-1, MMP-3)의 발현을 향상시키고 콜라겐 합성을 억제합니다 [ 16 ]. 

또한 NF- κB는 염증성 사이토 카인 (예 : 종양 괴사 인자 -α (TNF- α ), 인터루킨 (IL) -1, IL-6 및 IL-8) 및 접착 분자 (예 : 세포 간 접착 분자- 1 (ICAM-1)) [ 17 ].

가수 분해 된 콜라겐의 경구 보충은 ECM 단백질의 형성을 촉진하고, UV에 의한 노화를 늦추고, 섬유 아세포 증식을 개선하는 데 유용합니다 [ 18 – 20 ]. 

저 분자량 (0.3-8 kDa)의 작은 펩타이드 인 가수 분해 콜라겐은 장에 쉽게 흡수되고 조직에 사용할 수 있습니다 [ 21 ]. 

콜라겐 합성 촉진을위한 기본 메커니즘은 (i) 펩타이드 소화 후 흡수 된 아미노산이 섬유 아세포에서 콜라겐 생성을위한 건축 자재로 작용하거나 

(ii) 리간드로서의 올리고 펩타이드가 표면에 부착됩니다. 섬유 아세포는 콜라겐, 엘라스틴, HA의 분비를 촉진합니다 [ 1]. 

육지 동물의 콜라겐 공급원 외에도 최근 물고기의 배설물 (예 : 뼈와 비늘)과 고유 한 아미노 펩타이드 [ 22 ]를 고려 하여 어류 콜라겐이 여러 응용 분야에서 강조되었습니다 . 

수많은 세포, 동물 및 임상 연구에서 가수 분해 된 어류 콜라겐이 콜라겐 합성의 효율성을 높이고 MMP 발현을 억제하고 / 또는 피부 지수 (수화, 주름 등) 를 

개선하여 피부 노화 과정을 방지 할 수 있음을 확인했습니다 . ) [ 21 – 24]. 

그러나 우리가 아는 한, ROS 억제, 콜라겐 및 엘라스틴 생산 촉진, 가장 중요한 것은 가수 분해 콜라겐 제품에 대한 단백질 폴딩 및 DNA 복구 개선과 관련된 노화 방지에 대한 포괄적 인 견해를 

언급 한 보고서는 거의 없습니다. 

여기에서,이 연구 는 피부 노화에서 생선 콜라겐의 이점을 더 잘 이해하기 위해 이러한 지수에 대한 상대적으로 간단한 시험 관내 분석을 보여줍니다 .

2. 재료 및 방법

2.1. 재료 및 악기

엘라스틴 콜라겐 펩타이드 복합 주스 음료 (YAMII, Zhejiang Kazman Biotechnology Co., China); 성분 : 물, 생선 콜라겐 펩타이드 파우더 (12 %), 바나나 파우더, 사과 에센스, 체리 에센스, γ- 아미노 부티르산, 포도 가루, 알마 가루, 아사이 가루, 들깨 가루, 엘더베리 가루, 현미 가루, 꿀, 비타민 C, 에리트 리톨, 구연산, 과당 시럽, 자당, 향료), 인간 피부 섬유 아세포 (CCD-966Sk; ATCC®, CRL-1881), 최소 필수 10 % FBS, 1 % 페니실린 / 스트렙토 마이신 및 1mM 나트륨 피루 베이트 (Gibco), 3- (4,5- 디메틸 티아 졸 -2- 일) -2,5- 디 페닐 테트라 졸륨 브로마이드 (MTT, Amresco), 인산염 완충액이 포함 된 배지 생리 식염수 (PBS, 깁코), DMSO (ECHO), 콜라겐 에세이 키트 (Sircol), 미토콘드리아 막 전위 검출 키트 (BD), 2 , 7 -dichlorofluorescin diacetate (DCFH-DA, Sigma-Aldrich), 엘라스틴 분석 키트 (Biocolor), RNA 추출 키트 (Genaid Biotech), nCounter® 플랫폼 (NanoString Technologies), 유세포 분석 (BD) ELISA 리더 (BioTek).

2.2. 세포 생존력 분석

CCD-200 세포 966Sk  μ L 배양액은 24 시간 동안 96- 웰 플레이트에서 배양하고 37 ° C의 각 웰에 분산시켰다. 

배지는 0 %, 0.125 %, 0.25 % 또는 0.5 % 콜라겐 음료가 포함 된 신선한 배지로 교체되었습니다. 24 시간 배양 후, 세포를 UVA (10 J / cm 2 ) 하에 조사 하였다 . 

UVA 투여 량은 다른 관련 연구에서 참조되었습니다 [ 25 ]. 이어서, 15  μ L MTT (4 ㎎ / ㎖)을 4 시간 반응을 각 웰에 첨가 하였다. 

그 후 용액을 제거하고  50μL DMSO를 각 웰에 첨가하여 10 분 내에 포르 마잔 결정을 용해시켰다. 흡수 결과 (570 nm에서)는 ELISA 판독기로 기록되었습니다.

2.3. 콜라겐 분석

0.5mL 배양 배지의 CCD-966Sk 세포를 24 웰 플레이트의 각 웰에 첨가 한 다음 24 시간 배양 하였다. 

그런 다음 FBS가없는 배지에서 0 %, 0.125 %, 0.25 % 또는 0.5 % 콜라겐 음료로 배지를 교체 한 후 UVA (10 J / cm 2 ) 처리를 수행했습니다. 

48 시간 배양 후, 콜라겐 분석에 의한 콜라겐 함량의 추가 분석을 위해 세포를 웰로부터 수집 하였다.

2.4. 미토콘드리아 막 잠재력

2 mL 배양 배지의 CCD-966Sk 세포를 6- 웰 플레이트의 각 웰에 첨가 한 후 24 시간 배양 하였다. 

그 후 배지를 0 %, 0.125 %, 0.25 %, 0.5 % 콜라겐 음료로 교체 하였다. 24 시간 배양 후, 배지를 제거하고 세포를 PBS로 두 번 헹구었다. 

그 후, 트립신 분해 후 1.5 mL 미세 원심 분리 튜브에 세포를 수집하고 원심 분리 하였다. 

상청액을 폐기하고, 100  μ L JC-1 염료 용액 (키트 프로토콜에 의해 언급 된 바와 같이 염색 조제) 튜브에 피펫 팅하고 15 분 세포와 상호 작용. 결국 염료 용액을 제거하고 세포를 500  μ2 % FBS가 포함 된 L PBS. 마지막으로, 세포를 형광 분석을 위해 유세포 분석에로드했습니다.

2.5. ROS 분석

2 mL 배지의 CCD-966Sk 세포를 6- 웰 플레이트의 각 웰에 첨가하고 24 시간 배양 하였다. 

그런 다음 배지를 0 %, 0.25 % 또는 0.5 % 콜라겐 음료로 교체하고 1 시간 동안 배양했습니다. 

이후, 10  μ g / DCFH-DA (a ROS 표시기) 용액 ㎖를 각 웰에 15 분 동안 대기에 첨가 하였다. 그 후 10 J / cm 2 UVA 조사 (10 J / cm 2 ) 하에 세포를 조사 하였다 . 

마지막으로 트립신을 사용하여 세포를 수집하고 현탁 세포를 세포 계측법 (예 : 450-490 nm; Em : 510-550 nm)에로드했습니다.

2.6. 엘라스틴 분석

2 mL 배지의 CCD-966Sk 세포를 6- 웰 플레이트의 각 웰에 분산시키고 24 시간 동안 배양 하였다. 

그 다음, 배지를 0 %, 0.125 %, 0.25 % 또는 0.5 % 콜라겐 음료로 새로운 배지로 교체 한 다음 UVA (10 J / cm 2 ) 처리를 하였다. 

48 시간 배양 후 트립신을 사용하여 세포를 수집하고, 세포의 엘라스틴 수준을 엘라스틴 분석 키트로 분석 하였다.

2.7. mRNA 발현 분석

CCD-966Sk 세포 (10 J / cm 2 UVA로 처리 / 처리하지 않고 0.25 % 또는 0.5 % 콜라겐 음료를 포함하는 2mL 배지)를 6 웰 플레이트의 각 웰에 분산시키고 24 시간 동안 배양했습니다. 

그런 다음 nCounter® 플랫폼에서 mRNA 발현 수준의 분석을 수행하고 프로토콜의 권장 사항에 따라 작업을 수행했습니다.

2.8. 통계 분석

모든 측정 결과는 GraphPad Prism에서 분산 분석 (ANOVA) 및 사후 테스트 로 분석되었습니다 . 중요한 차이로 간주되었습니다.

3. 결과 및 고찰

3.1. 세포 생존력

테스트 전에 콜라겐 음료 0.125 %, 0.25 % 및 0.5 %를 준비하고 섬유 아세포에 대한 등장 성을 확인하려고 시도했습니다 (그림 S1 ). 

우리는 대조군과 실험군 간의 형태 학적 비교에 의한 증거로서 음료에서 CCD-966Sk 세포에 대한 삼투압의 해로운 영향을 발견하지 못했습니다. 

그림 1 은 다양한 농도의 콜라겐 음료 (UVA 조사 유무)로 처리 한 후 섬유 아세포의 세포 생존력 결과를 보여줍니다. 

콜라겐 음료의 0.125 %, 0.25 % 및 0.5 %는 대조군에 비해 세포 증식 능력을 약간 향상 시켰으며 세포 성장에 해로운 영향을 미치지 않았습니다 (그림 1 (a)).). 

또한 콜라겐 음료의 영향과 UVA 효과를 평가하기 위해 UVA 처리가 연구에 도입되었습니다 (샘플 처리 후). 

일부 연구에서는 UVA가 피부에 UVB보다 더 깊게 침투 할 수 있다는 점을 강조하고 (UVA : 진피에 20-30 %, UVB : 진피에 10 %) UVB가 아닌 UVA를 광노화 유도 소스로 사용했습니다. 

피부의 심오한 광노화 과정 조사 [ 26 ]. 

콜라겐 음료의 0.125 %, 0.25 % 및 0.5 %는 UVA 그룹과 비교하여 UVA 처리 된 섬유 아세포의 세포 생존 수준을 각각 7.9 %, 22.3 % 및 28.1 % 증가시킬 수 있습니다 (그림 1 (b)). 

개선은 용량 의존적 효과를 보였지만 가장 높은 농도에서만 상당한 개선을 보였다. 

또한 세포 회복 과정과 다소 닮은 콜라겐 음료 처리 단계 이전에 UVA로 처리 한 섬유 아세포와 UVA와 콜라겐 음료를 동시에 처리 한 섬유 아세포의 결과에 대해 궁금해했습니다 (그림 S2 ). 

샘플 처리 전에 섬유 아세포를 UVA로 처리 한 반면, 세포 생존력의 개선은 콜라겐 음료의 농도 증가와 반비례 관계가있었습니다 (그림 S2A ). 그 결과 높은 수준의 함량이 세포 수리의 효율성을 저해하고 결국 증식 능력을 손상 시켰기 때문일 수 있습니다. 반면에 공동 처리 결과는 그림과 유사했다.1 (b) (그림 S2A ). 이것은 콜라겐 음료에서 용질의 흡광도 때문일 수 있습니다.

(ㅏ)

(비)

(ㅏ)
(비)

그림 1 

섬유 아세포의 세포 생존력 결과. (a) CCD-966Sk 세포는 24 시간 동안 0 %, 0.125 %, 0.25 % 또는 0.5 %로 처리되었습니다. (b) CCD-966Sk 세포를 0.125 %, 0.25 % 또는 0.5 %로 24 시간 동안 처리 한 후 UVA 처리 (10 J / cm 2 )를 수행했습니다. (, ) (UVA 그룹에 해당 : ).

더욱이, 우리는 콜라겐 음료 및 / 또는 UVA로 처리 한 후 섬유 아세포의 상세한 세포 활동을 조사하기 위해 미토콘드리아 분석을 활용했습니다 (그림 2 , S3). 

대조군과 비교하여 콜라겐 음료의 0.125 %, 0.25 %, 0.5 %는 섬유 아세포의 미토콘드리아 활성을 각각 30.6 %, 16.4 %, 36.1 % 증가시킬 수 있습니다. 

광노화 개선과 관련하여 UVA 처리 된 세포의 미토콘드리아 활성은 각각 100.9 %, 110.2 %, 105.4 % 개선되었으며, 콜라겐 음료의 0.125 %, 0.25 %, 0.5 %로 처리되었습니다. 

따라서 콜라겐 음료는 원래 및 UVA 처리 된 섬유 아세포에서 미토콘드리아 막 잠재력을 현저하게 향상시킵니다. 

이러한 결과를 바탕으로 콜라겐 음료는 세포 생존력을 실질적으로 향상시키고 섬유 아세포의 미토콘드리아 활동을 촉진시킬 수 있습니다.

그림 2 

섬유 아세포의 미토콘드리아 활동 결과. CCD-966Sk 세포는 24 시간 동안 0 %, 0.125 %, 0.25 % 또는 0.5 %로 처리 한 후 UVA 관련 그룹에 대해 UVA 처리 (10 J / cm 2 )를 처리했습니다. (, ) (대조군에 해당 : ; UVA 그룹에 해당 :).

3.2. 콜라겐과 엘라스틴 합성

우리는 48 시간 동안 다양한 농도의 콜라겐 음료로 처리 된 섬유 아세포에서 콜라겐 및 엘라스틴 생성 촉진 효과를 추가로 평가했습니다. 

배양 설정은 CCD-966Sk 세포에서 세포 콜라겐과 엘라스틴 분비에 대한 독특한 관찰을 허용했습니다. 

콜라겐 음료의 0.125 %, 0.25 % 및 0.5 %는 대조군에 비해 섬유 아세포의 상대적인 콜라겐 생성 수준을 각각 11.1 %, 17.9 % 및 22.5 % 향상시킬 수 있습니다. 

콜라겐 음료의 0.125 %, 0.25 % 및 0.5 %는 UVA 그룹에 비해 UVA 처리 된 섬유 아세포의 상대적 콜라겐 생성 수준을 각각 17.9 %, 20.7 % 및 24.9 % 향상시킬 수 있습니다 (그림 3). 

결과는 콜라겐 음료가 48 시간 샘플 처리 후 세포 생존력의 손상을 염려하지 않고 섬유 아세포에서 콜라겐 합성 능력을 실질적이고 현저하게 향상시킬 수 있음을 나타냅니다. 

그림 S4 는 24 시간 시료 처리 후 세포 결과와의 유사성을 나타냅니다 (그림 2 ). 상대적인 세포 생존율의 급격한 하락 추세는 나타나지 않았습니다. 

외래 단백질을 높은 수준 [혜택 콜라겐 합성의 효율 개선의 이론으로 설명 될 수있는 용량 의존적 인 경향 개선 효과를 준수 27]. 

콜라겐 생성의 고무적인 결과 외에도 콜라겐 음료는 섬유 아세포의 엘라스틴 생성을 긍정적으로 향상 시켰습니다. 

콜라겐 음료의 0.125 %, 0.25 % 및 0.5 %는 대조군에 비해 섬유 아세포의 상대적 엘라스틴 생산 수준을 각각 7.9 %, 8.4 % 및 10.9 % 증가 시켰습니다. 

콜라겐 음료의 0.125 %, 0.25 % 및 0.5 %는 UVA 처리 된 섬유 아세포의 상대적인 콜라겐 생성 수준을 UVA 그룹에 비해 각각 13.8 %, 13.8 % 및 17.6 % 향상시킬 수 있습니다 (그림 4 ).

그림 3 

섬유 아세포의 콜라겐 생성 수준 결과. CCD-966Sk 세포를 48 시간 동안 0 %, 0.125 %, 0.25 % 또는 0.5 %로 처리 한 다음 UVA 관련 그룹에 대해 UVA 처리 (10 J / cm 2 )를 처리했습니다. (, ) (대조군에 해당 : ; ; UVA 그룹에 해당 :; ).

그림 4 

섬유 아세포의 엘라스틴 생산 수준의 결과. CCD-966Sk 세포를 48 시간 동안 0 %, 0.125 %, 0.25 % 또는 0.5 %로 처리 한 다음 UVA 관련 그룹에 대해 UVA 처리 (10 J / cm 2 )를 처리했습니다. (, ) (대조군에 해당 : ; ; UVA 그룹에 해당 :; ).

또한 ECM 관련 구성 요소 (즉, 콜라겐 (COL), 엘라스틴 (ELN) 및 히알루로 네이트 (HAS))의 유전자 발현을 분석했습니다 (그림 5 ). 

콜라겐 음료의 0.25 % 및 0.5 %는 COL1A1 , COL4A1 , ELN 및 HAS2 의 발현을 크게 상향 조절할 수 있습니다 .

원래 섬유 아세포에 대한 유전자. UVA 처리 후 콜라겐 음료는 이러한 유전자 발현 수준을 긍정적으로 조절했습니다. 

그러나 유전자의 개선 정도는 콜라겐 음료의 농도에 따라 다릅니다. 

일반적으로 콜라겐 음료 0.25 %는 0.5 %보다 대부분의 유전자에 대해 더 나은 상향 조절 효과를 부여했습니다. 

0.5 % 콜라겐 음료 그룹에서 낮은 유전자 발현은 부분적으로 일부 환경 스트레스 문제 때문일 수 있습니다. 

세포 수준에서 콜라겐 및 엘라스틴 발현과는 달리 24 시간 시료 처리로 특유의 유전자 발현을 명확하게 식별 할 수 있었으므로이 실험에서는 48 시간 배양 기간을 채택하지 않았습니다. 

종합 해보면 콜라겐 음료가 실제로 콜라겐과 엘라스틴의 발현과 관련 유전자를 상향 조절할 수 있음을 확인했습니다.

그림 5 

ECM 관련 성분에 대한 유전자 분석 결과. CCD-966Sk 세포는 24 시간 동안 0 %, 0.125 %, 0.25 % 또는 0.5 %로 처리 한 후 UVA 관련 그룹에 대해 UVA 처리 (10 J / cm 2 )를 처리했습니다. (, ) (대조군에 해당 : ; ; UVA 그룹에 해당 :; ; ).

3.3. UVA로 인한 산화 스트레스

산화 스트레스는 세포 노화의 중요한 원동력입니다. 

따라서 우리는 UVA로 인한 산화 스트레스 상황에서 콜라겐 음료의 항산화 능력을 연구하려고 시도했습니다 (그림 6 및 7 ). 

이전 실험을 고려할 때 개선 정도는 콜라겐 음료의 농도 증가와 양의 상관 관계가있었습니다. 

콜라겐 음료 그룹의 0.25 % 및 0.5 %의 상대 ROS 수준은 각각 3.2 및 3.6 배였습니다 (그림 6 ). 

UVA 그룹에 비해 콜라겐 음료는 UVA로 인한 산화 스트레스를 2.4 배 감소시킬 수 있습니다. 

두 농도 모두 섬유 아세포에서 ROS 생성에 대해 유사한 억제 효과를 수행했습니다. 

그림 7 은 식의 결과를 나타냅니다.

SOD1 (수퍼 옥사이드 디스 뮤 타제 1), SOD2 , CAT (카탈라제) 유전자. 섬유 아세포 의 SOD2 및 CAT 유전자의 상향 조절은 콜라겐 음료의 0.5 %에서만 양성 CAT 변조가 관찰 되었음에도 불구하고 콜라겐 음료로 처리 한 후에 달성되었습니다 . 결과는 ROS 결과와 관련이 있습니다. 

원래 세포의 경우 콜라겐 음료의 0.25 % 및 0.5 %는 SOD 1 및 SOD2 유전자 의 발현 수준을 현저하게 증가시킬 수 있습니다. 

따라서 콜라겐 음료는 UVA로 인한 산화 스트레스의 영향을 완화 할 수 있습니다.

그림 6 

섬유 아세포의 상대적 ROS 함량 결과. CCD-966Sk 세포를 24 시간 동안 0 %, 0.25 % 또는 0.5 %로 처리 한 후 UVA 처리 (10 J / cm 2 )를 수행했습니다. (, ) (대조군에 해당 : ; UVA 그룹에 해당 :).

그림 7 

항산화 효소 관련 유전자 분석 결과 CCD-966Sk 세포는 24 시간 동안 0 %, 0.25 % 또는 0.5 %로 처리 한 후 UVA 관련 그룹에 대해 UVA 처리 (10 J / cm 2 )를 처리했습니다. (, ) (UVA 그룹에 해당 : ).

3.4. 단백질 폴딩 및 DNA 복구

미토콘드리아 활동의 감소는 노화 과정과 무수한 질병의 발병과 관련이 있습니다 [ 28 ]. 

반대로, 적절한 미토콘드리아 상태를 유지하는 것은 노화를 지연시키고 특정 질병의 위험을 낮추는 수단입니다. 

따라서 우리는 단백질 폴딩, DNA 돌연변이 및 DNA 복구에 영향을 미칠 수있는 일부 유전자의 발현을 조사했습니다 (그림 8 및 9 ). 

CCT는 CCT1 CCT8 - 서브 유닛으로 구성된 (TCP1 착체를 함유하는 chaperonin) 올바른 단백질 폴딩하는 보호자 복합체이며, 그 구현은 셀 수명, 분할 및 마이그레이션 [과 연관된 29]. 

PTEN 유도 키나아제 1 (PINK1) / 파킨 매개 미토 파지는 파리의 미토콘드리아 DNA 돌연변이에 대한 완화 제로 인식되고 있으며 

돌연변이는 신경 퇴행성 질환의 발병과 관련이 있습니다 [ 30 ]. 

MLH1 (mutL 상 동체 1), MSH2 (mutS 상 동체 2) 및 MSH3 는 MMR 관련 유전자이며 돌연변이로 인해 위장 암이 발생합니다 [ 31 ]. 

더욱이 OGG1 (8-oxoguanine DNA glycosylase)과 UNG (uracil DNA glycosylase) 유전자는 BER에 관여한다 [ 31 , 32 ]. 그림 8 은 CCT2 , CCT5 , CCT6A 의 발현 결과를 보여줍니다., 

CCT8 및 PINK1 유전자. 콜라겐 음료는 원래 세포에 대한 올바른 단백질 폴딩 및 미토 파지 활동을 분명히 향상시킬 수있는 반면 

UVA 조사의 해로운 합병증은 콜라겐 음료의 개선 효과를 방해했습니다. 

그림 9 는 콜라겐 음료가 MMR 및 BER의 성능, 즉 원래 및 UVA 처리 된 섬유 아세포에서 MLH1 , MSH2 , MSH6 , OGG1 및 UNG 유전자 의 상향 조절을 크게 개선 할 수 있음을 나타냅니다 . 

한마디로 콜라겐 음료는 DNA 복구 효율을 향상시킬 수 있습니다.

그림 8 

단백질 폴딩 관련 유전자 분석 결과. CCD-966Sk 세포는 24 시간 동안 0 %, 0.25 % 또는 0.5 %로 처리 한 후 UVA 관련 그룹에 대해 UVA 처리 (10 J / cm 2 )를 처리했습니다. (, ) (대조군에 해당 : ; ; UVA 그룹에 해당 :).

그림 9 

MMR 및 BER 관련 유전자 분석 결과. CCD-966Sk 세포는 24 시간 동안 0 %, 0.25 % 또는 0.5 %로 처리 한 후 UVA 관련 그룹에 대해 UVA 처리 (10 J / cm 2 )를 처리했습니다. (, ) (대조군에 해당 : ; ; ; UVA 그룹에 해당 :; ).

결과적으로 콜라겐 음료의 시너지 효과는 세포 생존력과 콜라겐 및 엘라스틴의 발현을 향상시키고 ROS 손상을 줄이며 단백질 폴딩을 개선하고 

DNA 복구를 통해 섬유 아세포에서 DNA 돌연변이의 위험을 낮출 수 있습니다. 

실험 결과는 세포 모델을 기반으로하고 인간의 콜라겐 음료의 정확한 이점을 완전히 반영 할 수는 없지만 

(소화 시스템으로 인해) 긍정적 인 결과가 여전히 구강의 이점에 대해 더 세심한 통찰력을 가져올 수 있다고 겸손하게 믿습니다. 

노화 방지를위한 콜라겐 음료. 특히 콜라겐 음료의 콜라겐 함량 (12 %)은 다른 연구에 따라 실제 임상 효능을 수행 할 수 있습니다 [ 33 ].

4. 결론

이 연구는 생선 가수 분해 콜라겐 음료의 ROS 억제, ECM 단백질 합성 촉진, 단백질 폴딩 및 DNA 복구 개선에 대한 포괄적 인 노화 방지 효과를 보여줍니다. 

세포 행동의 결과는 콜라겐 음료가 세포 생존력을 향상시킬뿐만 아니라 콜라겐과 엘라스틴 합성을 촉진 할 수 있음을 나타냅니다. 

또한 분자 결과는 콜라겐 음료가 ECM 단백질 합성, 항산화 효소, 단백질 폴딩, DMR 및 BER과 관련하여 유전자 발현을 향상시킬 수 있음을 나타냅니다. 

한마디로, 생선 콜라겐 음료는 노화 매개 변수를 방해하고 인간 섬유 아세포의 산화 손상과 생리적 손실을 보상함으로써 피부 노화를 지연시키는 시너지 효과를 발휘합니다.

액상형태 콜라겐음료는 신이 주신 최고선물이라 생각합니다.