염증성 장질환에 있는 혈청 라미네인 및 콜라겐 IV

I E E Koutrubakis 1, E Petinaki, P Dimoulios, E Vardas, M Roussomoustakakaki, A N Maniatis, E A Kouroumalis
소속 확장
PMID: 14600124 PMCID: PMC1770111 DOI: 10.11336/jcp.56.11.817

요약
배경: /

목표: 라미네인과 콜라겐 IV가 세포외 매트릭스 혈청 마커로 제안되었다.

 섬유증은 염증성 장질환의 주요 합병증이기 때문에 궤양성대장염(UC)과 크론병(CD) 환자에서 혈청 농도의 라미네인과 콜라겐 IV를 측정해 염증성 및 건강 조절과 비교했다.

방법: 염증성 장질환 환자 170명(86UC, 84CD)을 대상으로 라미네인과 콜라겐 IV 혈청 농도를 측정하였으며,

장염의 다른 원인이 있는 23명의 환자를 대상으로 측정하였으며,

시중에서 구할 수 있는 효소 연계 면역항암제 검사를 사용하여 80명의 일치된 건강한 대조군에서 측정하였다.

라미네인과 콜라겐 IV 농도는 질병 활동, 유형, 국소화, 치료와 상관관계가 있었다.

결과: 평균(SD) 혈청 라미네인 농도는 UC 환자의 경우 281.0(110.1)ng/ml, CD 환자의 경우 275.6(106.7)ng/ml,

건강 제어의 경우 192.0(17.8)ng/ml, 염증 제어의 경우 198.5(32.5)ng/ml이었다. 평균(SD) 혈청 콜라겐 IV 농도는 UC 환자의 경우 72.8(22.9)ng/ml,

 CD 환자의 경우 71.0(18.2), 건강 제어의 경우 79.8(12.2)ng/ml, 염증 제어의 경우 88.9(24.6)ng/ml이었다. 두 마커에 대해 4개 그룹(p < 0.0001) 간에 유의미한 차이가 있었다.

혈청 라미네인은 콜라겐 4가 아닌 혈청 라미네인과 두 질환의 질병 활성도 사이에는 강한 상관관계가 있었다.

이러한 표지와 질병 국소화 또는 질병 유형 간에 유의한 연관성이 발견되지 않았다.

결론: 염증성 장질환자의 경우 혈청농도가 높아지는 반면 콜라겐 IV의 혈청농도는 낮아진다. 그것들은 지속적인 염증 및 조직 리모델링에 유용한 대리 표지일 수 있다.

장 섬유증의 세포 매개체와 섬유증과 정상 회복 사이의 관계는 잘 알려져 있지 않습니다.

섬유화 과정의 시작은 염증성 장 질환 (IBD)에서 만성 염증에 대한 장 반응의 일부라고 제안되었습니다.

장 섬유증은 세포 외 기질 성분의 과도한 생산이 특징입니다.

 조직의 세포는 이러한 세포 외 기질 단백질과 지속적으로 상호 작용하며 이러한 상호 작용은 세포 기능에 필수적입니다.

중요한 세포 외 기질 당 단백질은 피브로넥틴, 비트로 넥틴 및 라미닌입니다.

크론 병 (CD)의 협착은 라미닌과 공존하지만 피브로넥틴 및 비트로 넥틴과는 그렇지 않은 비만 세포가 많이 축적되는 것으로 밝혀졌습니다.

 Laminin은 기저막의 구조와 기능을 유지하는 데 핵심적인 역할을하는 유비쿼터스 기저막 구성 요소입니다.

^{4 증가} 된 혈청 라미닌 농도는 다양한 질병에서 발견되었습니다.

최근 연구에서 혈청 라미닌은 이러한 합병증이없는 환자에 비해 간담도 및 췌장 질환이있는 IBD에서 증가하는 것으로 나타났습니다.

"다양한 질병에서 증가 된 혈청 라미닌 농도가 발견되었습니다"

콜라겐 IV는 또한 기저막의 주요 구성 요소이며 간 질환  및 류마티스 관절염과 같은 만성 염증성 질환에서 정확한 세포 외 기질 혈청 마커로 사용되었습니다 .

IBD, 주로 CD에서 변경된 콜라겐 대사가 제안되었습니다.

우리 연구의 목적은 그리스 IBD 환자에서 라미닌과 콜라겐 IV의 혈청 농도를 측정하는 것이 었습니다.

우리는 질병 활동 및 질병의 임상 적 특성과 관련하여 이러한 마커의 중요성을 평가했습니다.

재료 및 방법

환자

크레타 헤라 클리 온 대학 병원의 위장병과에서 추적 한 IBD 환자 175 명이 우리 연구에 포함되었습니다

 (표 11).). IBD 환자 (평균 연령, 46 세, 남성 94 명, 여성 76 명)를 80 명의 건강한 대조군 (HC)과 비교하여 연령과 성별 (평균 연령, 47 세, 남성 47 명, 여성 33 명)을 비교했습니다.

 HC는 건강한 헌혈자, 건강한 병동 방문자 (부인과 / 산부인과 및 정형 외과) 및 일반 병원 직원으로부터 모집되었습니다.

또한 비 IBD 장 염증을 가진 23 명의 환자 (평균 연령, 50 세, 남성 12 명, 여성 11 명)를 염증 대조군으로 사용했습니다.

감염성 대장염은 6 명, 허혈성 대장염은 7 명, 게실염은 10 명이었다.

혈청은 IBD 환자 170 명, 염증성 대조군 23 명, HC 80 명으로부터 수집되었습니다.

UC 및 CD의 진단은 표준 기준에 근거했습니다. ¹¹IBD 환자 170 명 중 7 명 (UC 환자 5 명, CD 환자 2 명)은 내시경 역 행성 담관 조영술로 원발성 경화성 담관염 진단을 받았습니다.

CD에서의 질병 활성은 Crohn의 질병 활성 지수 (CDAI) 점수, ^{12를 사용} 하여 평가되었고 UC에서는 단순 임상 대장염 활성 지수 (SCCAI)에 의해 평가되었습니다.

골관절염, 류마티스 관절염, 유방암, 대장 암 환자는 제외되었습니다.

원발성 경화성 담관염 이외의 간 질환 환자도 제외되었으며 6 건 (알코올성 3 건, 바이러스 성 간염 2 건)으로 구성되었습니다.

결장 직장암과 관련하여, IBD를 가진 모든 환자는 정기적 인 대장 내시경 및 생검을 통해 감시 프로그램을 받았습니다.

적혈구 및 백혈구 수, 헤모글로빈, 헤마토크릿, 혈소판 수, 알부민, 적혈구 침강 속도 및 C 반응성 단백질 (CRP)을 포함한 표준 실험실 매개 변수를 모든 환자에서 일상적으로 측정했습니다.

모든 혈청 샘플은 분석 될 때까지 -70 ° C에서 보관되었습니다. 우리의 연구 프로토콜은 크레타 의학부의 윤리위원회의 승인을 받았습니다.

1 번 테이블

연구에 포함 된 환자의 임상 세부 사항

* 일부 환자는 하나 이상의 약물을 받았습니다.

CD, 크론 병; UC, 궤양 성 대장염.

실험실 연구

혈청 라미닌은 모든 IBD 환자 및 대조군에서 상업적으로 이용 가능한 분석 (QuantiMatrixTM 인간 라미닌 효소 결합 면역 흡착 분석 키트; Chemicon International, Temecula, California, USA)을

사용하여 결정되었습니다.

혈청 콜라겐 IV는 또한 콜라겐 IV의 여러 항원 부위를 인식하기 위해 한 쌍의 단일 클론 항체를 사용하는

1 단계 샌드위치 효소 면역 분석 인 Biotrin Collagen IV 효소 면역 분석법 (Biotrin International GmbH, 독일 Sinsheim-Reihen)에 의해 측정되었습니다.

이러한 분석으로 검체를 8 회 이상 동시에 측정하면 측정 값에 대한 분산 계수는 각각 라미닌과 콜라겐 IV에 대해 12 % 및 15 % 미만입니다.

통계 분석

모든 결과는 평균 (SD)으로 표시됩니다. 연속 측정 측면에서 4 개의 진단 그룹 간의 비교는 Kruskal-Wallis 테스트 (비모수 ANOVA)에 의해 이루어졌습니다.

 Dunn의 테스트에서 사후 다중 비교 테스트를 수행했습니다.

질병 국소화 그룹 간의 비교를 위해 동일한 테스트가 사용되었습니다.

두 그룹 (활동성 대 비 활동성 질환, 협착 성 대 비 협착 성 CD 등) 간의 비교는 Student 's t 를 사용하여 이루어졌습니다.

테스트 또는 Mann-Whitney U 테스트. Kolmogorov 및 Smirnov 검정은 데이터가 가우스 분포를 갖는 모집단에서 샘플링되었다는 가정을 평가하는 데 사용되었습니다.

혈청 라미닌 또는 콜라겐 IV와 질병 활성 지수 또는 기타 실험실 매개 변수 간의 연관성을 선형 회귀 분석으로 조사했습니다. 선형성 평가는 런 테스트로 수행되었습니다. p <0.05의 수준은 중요한 것으로 간주되었습니다.

결과

그림 11 그리고 22환자와 대조군에서 라미닌과 콜라겐 IV의 분포를 보여줍니다.

평균 (SD) 혈청 라미닌 농도는 UC 환자에서 281.0 (110.1) ng / ml, CD 환자에서 275.6 (106.7) ng / ml,

 건강한 대조군에서 192.0 (17.8) ng / ml 및 198.5 (32.5) ng / 비 IBD 장 염증 환자의 ml. 네 그룹에서 라미닌의 평균 농도 사이에 유의 한 차이가 발견되었습니다

 (p <0.0001). 다중 비교 Dunn의 테스트는 UC 및 CD 환자의 평균 라미닌 농도가 비슷하다는 것을 보여주었습니다

 (p> 0.05). 유사하게 라미닌 농도는 두 그룹의 대조군 (HC 및 비 IBD)간에 차이가 없었습니다.

 UC 및 CD 환자는 두 대조군 그룹보다 훨씬 더 높은 라미닌 농도를 가졌습니다

 (UC v HC, p <0.001; UC v비 IBD, p <0.01; CD v HC, p <0.001; CD v비 IBD, p <0.01). IBD 환자 121 명 (61 UC, 60 CD; 71.2 %)은

일치하는 건강한 대조군의 95 백분위보다 높은 라미닌 농도를 가졌습니다.

대조적으로, 평균 (SD) 혈청 콜라겐 IV 농도는 UC 환자에서 72.8 (22.9) ng / ml, CD 환자에서 71.0 (18.2), 건강한 대조군에서 79.8 (12.2) ng / ml, 그리고 88.9 (24.6) ng였습니다.

 비 IBD 장 염증 환자에서 / ml. UC 및 CD 환자는 건강한 염증 대조군보다 혈청 콜라겐 IV 농도가 유의하게 낮았습니다.

 네 그룹에서 콜라겐 IV의 평균 농도 사이에는 유의 한 차이가있었습니다

(p <0.0001). Dunn의 테스트는 UC 및 CD 그룹이 두 그룹의 대조군 (HC 및 비 IBD)과 마찬가지로 유사한 평균 콜라겐 IV 농도 (p> 0.05)를 가짐을 보여주었습니다.

v HC, p <0.001; UC v 비 IBD, p <0.01; CD v HC, p <0.001; CD v 비 IBD, p <0.01).

그림 1

건강한 대조군 (HC, n = 80), 궤양 성 대장염 (UC, n = 86), 크론 병 (CD, n = 84) 및 비염증성 장 질환 (비 IBD) 환자에서 라미닌의 분포 ( n = 23).

각 개별 환자 또는 대조군은 원으로 표시됩니다. 굵은 선은 평균값입니다.

그림 2

건강한 대조군 (HC, n = 80), 궤양 성 대장염 (UC, n = 86), 크론 병 (CD, n = 84) 및 비염증성 장 질환 (비 IBD) 환자에서 콜라겐 IV 분포 ( n = 23).

각 개별 환자 또는 대조군은 원으로 표시됩니다.

굵은 선은 평균값입니다.

질병 활성과 관련하여 혈청 라미닌 농도는 UC 환자 (평균, 309.1; SD, 103.5ng / ml)에서 비활성 기 (평균, 257.6; SD, 110.8ng / ml; p = 0.03; 짝이없는 t 테스트). 데이터는 정규 분포를 따릅니다

 (Kolmogorov 및 Smirnov 테스트, p> 0.10). 유사하게, CD 환자에서 평균 (SD) 라미닌 농도는 활동성 질환에서 315.2 (134.1) ng / ml였으며, 비 활동성 질환에서 볼 수있는 것보다 훨씬 높았습니다

(평균, 256.0; SD, 84.6 ng / ml; p = 0.04). ; 쌍을 이루지 않은 tWech 수정으로 테스트하십시오.

 Kolmogorov 및 Smirnov의 정규성 테스트, p> 0.10). 평균 혈청 콜라겐 IV 농도는 두 질병의 활성기와 비활성 기간에 유의 한 차이가 없었습니다

 (UC : Mann-Whitney U 통계, 723.5; p = 0.5; CD : Mann-Whitney U 통계, 661; p = 0.21).

혈청 라미닌 농도는 직장염 환자에서 왼쪽 또는 광범위한 대장염 환자보다 낮았지만 차이는 크지 않았습니다

 (p = 0.26). 또한 회장 국소화가있는 CD 환자는 담장 성 (평균, 279.9.5; SD, 85.2 ng / ml) 및 결장 질환 환자보다 라미닌 농도 (평균, 290.9.3; SD, 90.1 ng / ml)가 더 높았습니다.

(평균, 257.7; SD, 128.8 ng / ml), 그러나 차이는 유의미하지 않았습니다 (p = 0.4).

다른 하위 그룹에 대한 후속 분석에서는 혈청 라미닌 또는 콜라겐 IV 농도와 질병 유형 (협착 대 비 협착), 진단 기간 (초기 대 후기 질병), 흡연 습관,

현재 5-와 같은 약물 사용간에 유의 한 상관 관계가 없음이 밝혀졌습니다.

아미노 살리실산, 프레드니손 및 아자 티오 프린. IBD 및 원발성 경화성 담관염 환자 (7 명의 환자)는 콜라겐 IV 농도 (평균, 105.9; SD, 35.9ng / ml)가 유의하게 높았지만,

라미닌 농도 (평균, 283.9; SD, 133.5ng / ml)는 환자와 비교하여 비슷했습니다.

 원발성 경화성 담관염없이.

혈청 라미닌은 CRP ( r = 0.46; p = 0.02)와 양의 상관 관계가 있었고 알부민과 음의 상관 관계 ( r = -0.54; p = 0.006)였습니다.

런 테스트를 사용하여 선형성에서 유의 한 편차가 발견되지 않았습니다.

반대로 혈청 콜라겐 IV와 CRP 또는 알부민 사이의 상관 관계는 발견되지 않았습니다.

혈청 라미닌 또는 콜라겐 IV와 임상 활성 지표 (CDAI 및 SCCAI) 사이의 상관 관계는 발견되지 않았습니다.

토론

우리의 연구는 IBD 환자에서 라미닌의 혈청 농도가 증가하는 반면 콜라겐 IV의 혈청 농도는 감소한다는 것을 보여줍니다.

 순환 결합 조직 대사 산물의 측정은 다양한 질병에서 섬유 증식 활성을 평가하는 데 유용한 도구로 제안되었습니다.

염증성 장 질환에서 볼 수있는 오래 지속되는 염증은 장기적인 복구 과정을 유도하여 조직 구조와 협착 형성에 돌이킬 수없는 변화를 일으킬 수 있습니다.

염증성 세포 침윤의 정도와 분포는 UC ¹⁴ 에서 관찰되는 점막하 콜라겐 증가 와 CD의 빈번하게 합병증 인 경벽 섬유증, 협착 및 폐쇄를 포함하여 IBD의 임상 결과를 결정할 수 있습니다 .

• 염증성 장 질환 (궤양 성 대장염과 크론 병 모두)이있는 환자는 혈청 라미닌 농도는 증가했지만 콜라겐 IV의 혈청 농도는 감소했습니다.

• 콜라겐 IV가 아닌 혈청 라미닌 농도는 두 질병 모두에서 질병 활성과 상관 관계가 있습니다.

• 이러한 마커와 질병 국소화 또는 질병 유형 사이에는 유의 한 연관성이 없었습니다.

• 이러한 단백질은 지속적인 염증 및 조직 재 형성에 유용한 대리 마커가 될 수 있습니다.

기저막의 주요 비 콜라겐 성분 인 라미닌은 상피 기저층 형성에 중요한 역할을하며 인간 장 세포의 분화를 촉진합니다.

최근 연구에서 UC에 의해 영향을받은 결장 조직의 crypt를 둘러싸고있는 상피 기저막에서 라미닌에 대한 긍정적 인 면역 반응이 보이지 않았습니다.

 혈청 라미닌은 이러한 합병증이없는 환자에 비해 간담도 및 췌장 질환이있는 IBD 환자에서 증가하는 것으로 밝혀졌습니다.

이 연구는 건강하거나 염증성 통제가 없다는 점에서 제한적이었습니다.

우리의 연구는 IBD 환자, 장 염증의 다른 원인이있는 환자 및 건강한 대조군의 혈청 라미닌 농도를 비교 한 첫 번째입니다.

우리는 IBD 환자에서 증가 된 혈청 라미닌 농도가 질병 활동과 관련이 있지만 간담도 장애와는 관련이 없음을 발견했습니다.

프로테아제에 의한 분해에 상대적으로 저항성이있는 순환 라미닌은 기저막 요소이기도 한 콜라겐 IV의 농도에 의해 확인되지는 않지만 기저막 분해를 반영 할 수 있습니다.

혈관 내피 세포 손상의 지표가 될 수 있으며, 이는 추가 조사가 필요합니다.

"우리는 IBD 환자에서 증가 된 혈청 라미닌 농도가 질병 활동과 관련이 있지만 간담도 장애와는 관련이 없음을 발견했습니다."

최근 연구에 따르면 건강한 대조군과 비교할 때 CD 환자의 말초 및 비장 순환에서 프로 콜라겐 I 및 III의 프로 펩티드는 감소한 반면 콜라겐 I의 C- 말단 프로 펩티드는 증가했습니다.

 우리가 아는 한, IBD에서 순환하는 콜라겐 IV에 대한 발표 된 데이터는 없습니다.

 콜라겐 IV 축적은 UC 환자의 조직 샘플에서 발견되었습니다.

우리의 데이터는 IBD에서 변경된 콜라겐 대사에 대한 추가 증거를 제공합니다.

IBD에서 낮은 혈청 콜라겐 IV의 발견은이 분자가 국소 적으로 유지되거나 분해되어 순환으로의 탈출 속도가 감소한다는 제안으로 설명 될 수 있습니다.

결론적으로, 혈청 라미닌과 콜라겐 IV의 측정은 염증성 장 질환에서 지속적인 염증 및 조직 재 형성을위한 유용한 대리 마커가 될 수 있습니다.

약어

• CD, 크론 병

• CDAI, 크론 병 활동 지수

• CRP, C 반응성 단백질

• HC, 건강한 통제

• IBD, 염증성 장 질환

• SCCAI, 단순 임상 대장염 활동 지수

• UC, 궤양 성 대장염